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*3細胞の再分離 |
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15mlコニカルチューブに3.5mlFicoll-Paqueを入れる |
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増えてこなくなった培養液をFicoll-Paqueの上に重層する |
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| 3 |
フラスコを20%RPMIでとも洗いしてさらに重層する(total10mlになるくらい) |
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| 4 |
1500rpm,15min,ブレーキoff |
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白い層が見えていればFBS(-)RPMI、白い層が見えなければ20%RPMIを新しい15mlコニカルチューブにいれておく |
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| 6 |
遠心したチューブの上清はすてて、白い層orそのあたりの層とそのすぐ下のFicoll-Paque層を計3mlピペットで吸いとり5の中に入れる |
| 7 |
軽く攪拌する |
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1500rpm,15min,ブレーキon |
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上清をデカントですてる |
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10ml,20%RPMIを加える |
（フィコールをしっかりと取り除くために行う） |
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| 11 |
軽く攪拌する |
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1500rpm,5min,ブレーキon |
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上清をデカントですてる |
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濁り具合を見ながら1X104/ml位になるように20%RPMIを加える・・・約1.5ml |
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FALCON2058の5mlチューブに入れて継代を続ける |
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継代は2/W |
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下に白いものがわずかに見えるので、そのぎりぎりのところまでtransfer
pipetでメディウムを吸い取り、吸い取ったのと同じ量を加える |
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細胞数が増えだしたらメディウムを増やしていきフラスコに戻していく |
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フラスコに戻せる状態になるまでは20%RPMIで継代する |
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