check項目コウモク こりうる問題モンダイ 解決方法カイケツホウホウ対処方法タイショホウホウ
電源デンゲン 電源の入れ方、切り方 機会キカイコワれる。 テスタロッサ:本体ホンタイにつけたシールの順番にあわせて、電源を入れる。モデナ:本体ホンタイシタから電源デンゲンれる。
電源の切り方 機会キカイコワれる。 どちらもれるときとギャク順番ジュンバン電源デンゲンる。
バッファー バッファーのリョウ 機会のエラーでバッファーが流れっぱなしになる場合バアイがある。 夜間WAVEをかけておくときは数サンプルを流す場合でも、必ず、一晩流れ続けても問題ないバッファーの量があるかを確認する。
バッファーのツクカタ 非常ヒジョウ微妙ビミョウで、スコしのチガいがピークに影響エイキョウする。 トクに、BとAバッファーは慎重シンチョウツクること。特にBトクニのアセトニトリルのリョウ重要ジュウヨウ!!
ランプ ランプのつけておく期間キカン 長期間使用チョウキカンシヨウしないときは消さないとドンドンランプの寿命ケサナイドンドンジュミョウミジカくなる。 2ニチ以上イジョウ使ツカわない場合バアイは、ランプをす。土曜ドヨウヨル使用シヨウされていない場合バアイ鈴木スズキしますので、月曜日ゲツヨウビ使うときはcツカウトキハheckしてください。ただし、ギャク頻回ヒンカイにつけたりしたりするのもくないので注意チュウイ!!
使用前のcシヨウマエノheck ランプのcheck ランプがついていないと解析出来カイセキデキない。 使用前シヨウマエにはランプがいていることを確認カクニンする。
C WASH airが混入コンニュウして解析カイセキがうまくいかない? 使用前シヨウマエに"WASH"をして側面のシリンジにairがないことを確認してください。
バッファー表示ヒョウジ確認カクニン Dが100だと、直前チョクゼン洗浄センジョウした状態ジョウタイなのでこのまま解析カイセキすると平衡ヘイコウがされていない。 カラムにとってはD bufferで充填された状態のが良いので、使ツカう直前にA50%,B50%でヤク30分間フンカン平衡化する。
解析カイセキジョウ ログヒョウ記入キニュして使用シヨウする!!
サンプルのcheck バッファー(バッファーは結構ケッコウ高額ホカコウガク)と時間ジカン無駄ムダになる。 PCRがうまくいっているかカナラ電気泳動デンキエイドウ確認カクニンしてからWAVEを使用シヨウする。
sequence配列ハイレツ入力ニュウリョク これがチガっていると正確セイカクなピークの位置イチせない=ピークがたない。 解析カイセキしたいPCR産物サンブツのsequence配列ハイレツ入力ニュウリョクする。Forward primerのハジまりから、back primerのわりまで!!
WAVEのシステムでmelting tem.のcheck しっかり設定セッテイしないと、全体ゼンタイをきちんと解析カイセキすることが出来デキない=見落ミオとしやすくなる。 SEQのゼン領域が70%くらいの領域を含むように温度をいくつか選択する
条件設定ジョウケンセッテイ airなどの影響で小さなピークがretation time3前後ゼンゴにでるので、ピークを3前後でたてると、解析するときに変異ヘンイなのかアーチファクトなのかがかりにくい。その結果ケッカsケッキョクムヨウナeqで無用ムヨウ確認カクニンをすることとなる。 ピークがretation time5前後に立つように調整する。タダし、中には5前後でピークをたてると、ピークがダルになり、かえってわかりにくくなる場合がある。その時はどちらが見やすいかで選択する。
ピークがきれいつか条件設定ジョウケンセッテイ段階ダンカイ確認カクニン 最初サイショからピークが一本イッポンでないものは結局ケッキョクうまく解析カイセキできない=無駄ムダになるだけ!! 最初サイショ条件設定ジョウケンセッテイでピークが一本イッポンにならないモノは、seqを確認カクニンする。seqがうまくめないモノはこれで解析カイセキしても結局分ケッキョクワからない!!primer setをツクナオすのがよい。
うちをする 設定セッテイした条件ジョウケンであわせておいても、いきなりサンプルをナガすと、最初サイショの3つほどはピークの位置イチがずれる。 最初の3サイショノパツほどは、機会キカイ特性上トクセイジョウどうしても、本来ホンライ位置イチよりも後方コウホウにずれたりするので、injectionのvolumeを0にして3カイほどカラうちしてから(サンプルをかずにってはダメ!!機会キカイまってしまう!!サンプルはセットした状態ジョウタイでinjectionのvolumeを0とする)本来ホンライのサンプルをつようにする。
ピークを確認カクニンする 条件ジョウケンセ設定セッテイであわせても、そのトキのバッファーの微妙ビミョウチガいなどのためにピークの位置イチがずれることがある。 カナラず、自分ジブンで96サンプルの最初サイショの2つホド確認カクニンすること!!
PCR産物サンブツ 必要最低量ヒツヨウサイテイリョウで!! dead volumeが約5ヤクulいるので、必要量+ヒツヨウリョウ5ulとして計算ケイサンする。
コンピューターのフォルダー ”C”フォルダーでデーターをれると、”C”が一杯イッパイになったときにWAVEがウゴかなくなる!! フォルダーが”D”であることをカナラ確認カクニンする。
バッファーのリョウ確認カクニン 機会のエラーでバッファーが流れっぱなしになる場合バアイがある。 夜間WAVEをかけておくときは数サンプルを流す場合でも、必ず、一晩流れ続けても問題ないバッファーの量があるかを確認する。
途中トチュでWAVEがまったとき カナラエラーログ印刷インサツしてから、再起動サイキドウする!!印刷インサツブツアブツはエラーログのファイルにハサんでおく。
メンテナンス カラムのメンテナンス しっかり行わないとドンドン劣化オコナワナイドンドンレッカする!! 96サンプル使用後(続けてする場合はそれが終了してからで良いです)は80℃,Dバッファー100%,1.5ml/minでヤク30フン洗浄する。
カラムのメンテナンス しっかり行わないとドンドン劣化オコナワナイドンドンレッカする!! 時々トキドキ、カラムの方向ホウコウえるホウいが、カラムの方向ホウコウえるとピークのカタチわる可能性カノウセイがある。条件設定ジョウケンセッテイをまとめてした場合バアイは、それがわるまではカラムの方向ホウコウえないホウ無難ブナンタダし、ずっとえないけにはいかないので、しばらく使用シヨウしていない場合バアイは、鈴木スズキ方向ホウコウえます。使用前シヨウマエにログをcheckしてください。
カラムによいジョウケン しっかり行わないとドンドン劣化オコナワナイドンドンレッカする!! バッファーがナガれていないときは、Dバッファーでカラムをたしておくのが一番イチバンカラムにヤサしい!!使用後シヨウゴスコしでもいので、Dバッファー100%でナガしておく。
カラムを1週間以上使用シュウカンイジョウシヨウしないトキ カラムは使ツカわない場合バアイはWAVEにつけたままだと、カラムがカワいて劣化レッカススむ!! 1週間以上つかわない場合はカラムは取り外すこと。
結果ケッカアツカ 陽性ギヨウセイ確認カクニン PCRジョウのミスリーディングによる場合バアイがある。 つかったヘテロが1,2のみである場合バアイは、PCRジョウのミスリーディングによる場合バアイ結構ケッコウある。この場合バアイはもう一度イチドそのサンプルをPCRしナオして、WAVEにかけて再現性サイゲンセイ確認カクニンする。再現性サイゲンセイがあればsequenceをして最終確認サイシュウカクニンをする。この過程カテイハブくと、陽性ギヨウセイ除外ジョガイムヅカしい。ただし、ヘテロが10%以上イジョウミトめられる場合バアイ必要ヒツヨウない。
偽陰性ギインセイ確認カクニン 見落ミオとすのはもったいない!! ピークにわずかな”カタ”としてしかられないモノもある。ウタガわしい場合バアイは、再現性サイゲンセイ見てからsミテカラeqする。このとき、ピークがどの位置イチっているかが非常ヒジョウ重要ジュウヨウとなる。Retation time3前後ゼンゴだと、アーチファクトか、本物ホンモノかがからなくなる。このため、ピークの位置は5イチハ前後ゼンゴっていくのが無難ブナン
偽陰性ギインセイ確認カクニン 見落ミオとすのはもったいない!! WAVE上1ジョウ0%以上イジョウヘテロと思われるオモワレル ピークがあるにもかかわらず、seq ではヘテロを感知カンチできないモノがある。この場合バアイは、クローニングしたウエでseqを確認カクニンするのが重要ジュウヨウ!!